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一、老化前準(zhǔn)備：避免 “先天失誤"

1. 確認(rèn)色譜柱類型，匹配老化條件
   不同固定相的耐受溫度、極性差異極大，需先明確柱參數(shù)（查看柱標(biāo)或說明書），核心關(guān)注兩個溫度：
   反面案例：將僅耐受 250℃的 FFAP 柱（強極性，用于有機酸分析）升溫至 300℃老化，會導(dǎo)致固定相嚴(yán)重流失，基線劇烈漂移，后續(xù)無法正常分離。

• 最高使用溫度（Max Operating Temp）：老化最高溫度需低于此值10-30℃（如固定相為 OV-1701 的柱最高溫 280℃，老化最高溫建議 250-270℃），防止固定相分解、流失導(dǎo)致柱效下降。

• 使用溫度：若為低溫固定相（如聚乙二醇類，PEG-20M），室溫老化可能無法去除高沸點雜質(zhì)，需從50-80℃ 開始升溫。

2. 色譜柱連接：“斷尾接載氣，防檢測器污染"

• 老化時不接檢測器（如 FID、TCD、MSD），僅將色譜柱一端連接進(jìn)樣口，另一端懸空或接入廢氣管路（用管線導(dǎo)出室外，避免有害氣體擴散）。

• 原因：老化過程中揮發(fā)的低分子固定相或雜質(zhì)若進(jìn)入檢測器，會污染檢測器（如 FID 噴嘴積碳、MSD 離子源污染），導(dǎo)致靈敏度下降、基線噪音增大。

• 連接進(jìn)樣口時，確保石墨墊密封良好（避免載氣泄漏），柱端插入進(jìn)樣口的深度符合儀器要求（通常為 4-6mm，具體看儀器說明書）。

3. 載氣選擇與純度：“高純度是底線"

• 必須使用高純度載氣：氣相色譜（GC）常用氮氣、氦氣（MSD 聯(lián)用優(yōu)先），純度需≥99.999%（5 個 9），并搭配脫氧管、脫水管（去除載氣中微量 O?和 H?O）。

• 禁止用空氣或氧氣老化：O?會與固定相在高溫下發(fā)生氧化反應(yīng)，破壞固定相結(jié)構(gòu)（如聚硅氧烷類固定相斷鏈），導(dǎo)致柱效驟降、壽命縮短。

• 載氣流量設(shè)定：按色譜柱規(guī)格（如內(nèi)徑 0.25mm 的柱，流量通常 1-2mL/min），以 “能將雜質(zhì)帶出柱外，但不導(dǎo)致峰展寬" 為原則，老化過程中流量保持穩(wěn)定（避免波動）。

二、升溫過程：“慢升溫 + 階梯控溫，拒絕驟升驟降"

1. 初始恒溫：“低溫除易揮發(fā)雜質(zhì)"

• 先將柱溫升至50-80℃（或略高于室溫 20-30℃），恒溫10-30 分鐘。

• 目的：去除柱內(nèi)吸附的低沸點雜質(zhì)（如儲存時進(jìn)入的空氣、水分、溶劑殘留），避免后續(xù)高溫時這些雜質(zhì)與固定相反應(yīng)。

2. 階梯升溫 / 程序升溫：“梯度除高沸點雜質(zhì)"

• 按 “每階升溫 20-30℃，恒溫 15-60 分鐘" 的節(jié)奏，逐步升至老化最高溫度（低于柱最高使用溫度 10-30℃）。
  示例（以最高使用溫度 280℃的柱為例）：
  50℃（恒溫 20min）→ 80℃（恒溫 20min）→ 110℃（恒溫 20min）→ ... → 250℃（恒溫 60-120min，此為最終老化溫度）。

• 關(guān)鍵：最終老化溫度的恒溫時間需足夠長（通常 30-120 分鐘，視柱長和污染程度調(diào)整），直到后續(xù)基線穩(wěn)定（接檢測器后觀察）。

• 禁止 “驟升驟降"：升溫速率≤30℃/min，降溫速率≤50℃/min，防止色譜柱因熱脹冷縮產(chǎn)生物理損傷（如柱床塌陷、固定相脫落）。

三、老化中監(jiān)控：“看基線 + 聞氣味，判斷是否完成"

1. 基線監(jiān)控（接檢測器后）
   老化后期（達(dá)到最終溫度并恒溫時），將色譜柱另一端連接檢測器，開啟檢測器（如 FID 點火，MSD 調(diào)諧），觀察基線：

• 若基線從 “漂移劇烈、噪音大" 逐漸變?yōu)?“平穩(wěn)（噪音≤0.1mV，漂移≤0.5mV/h）"，說明雜質(zhì)已基本去除，老化完成。

• 若基線持續(xù)漂移（如 FID 基線一直上升），可能是固定相仍在流失，需檢查：① 老化溫度是否過高；② 載氣是否含 O?（脫氧管失效）。

2. 氣味判斷（謹(jǐn)慎操作）
   老化初期（柱端懸空時），可在通風(fēng)處輕聞柱端揮發(fā)氣體：

• 若有 “溶劑味（如甲醇、丙酮）" 或 “焦糊味"，說明有雜質(zhì)或固定相輕微流失，需繼續(xù)老化；

• 當(dāng)氣味消失，且后續(xù)基線穩(wěn)定，可結(jié)束老化。
  * 注意：避免長時間聞，部分固定相揮發(fā)物（如聚硅氧烷）有刺激性。

四、老化后降溫與保存：“防污染 + 保活性"

1. 降溫操作

• 關(guān)閉升溫程序，待柱溫降至50-80℃（或室溫附近） 后，再關(guān)閉載氣（禁止高溫時斷載氣）。

• 原因：高溫時柱內(nèi)固定相處于 “活躍狀態(tài)"，斷載氣會導(dǎo)致空氣進(jìn)入柱內(nèi)，氧化固定相；低溫時固定相穩(wěn)定，可減少污染風(fēng)險。

2. 色譜柱保存

• 若短期不用（1 周內(nèi)）：保持載氣輕微流動（0.5-1mL/min），或用密封帽封住柱兩端（防止空氣、水分進(jìn)入），存放于室溫、干燥環(huán)境。

• 若長期不用（1 個月以上）：需再次老化后保存，或選擇與固定相兼容的溶劑（如正己烷）沖洗柱后密封（僅限填充柱，毛細(xì)管柱不建議溶劑沖洗）。

五、特殊情況處理：“不同柱型，區(qū)別對待"

1. 毛細(xì)管柱 vs 填充柱

• 毛細(xì)管柱：固定相涂覆在柱內(nèi)壁，更易流失，老化溫度需更保守（低于最高溫 20-30℃），升溫速率更慢（≤20℃/min）。

• 填充柱：固定相顆粒填充，雜質(zhì)易殘留，最終老化溫度可接近最高使用溫度（低 10℃即可），恒溫時間需更長（120-180 分鐘）。

2. 新柱 vs 舊柱

• 新柱：老化需 ，最終恒溫時間延長至 60-120 分鐘，確保去除生產(chǎn)時的固化劑、低分子聚合物。

• 舊柱（使用后污染）：若因樣品殘留導(dǎo)致柱效下降，老化前可先用 “溶劑沖洗"（如非極性柱用正己烷，極性柱用乙醇），再按常規(guī)老化流程操作，避免殘留樣品與高溫固定相反應(yīng)。

3. MSD 聯(lián)用柱
   老化時需特別注意：

• 載氣必須用氦氣（氮氣會影響 MSD 靈敏度），且純度≥99.999%；

• 柱端連接 MSD 時，需先在 “分流模式" 下老化（分流比 50:1 以上），避免大量雜質(zhì)進(jìn)入離子源；

• 老化完成后需重新調(diào)諧 MSD，確保離子源清潔。

六、常見誤區(qū)避坑